1.范圍

本標準規(guī)定了甲胺磷等有機磷和克百威等氨基甲酸醋類農(nóng)藥在蔬菜中的殘毒快速檢測方法。
本標準適用于葉菜類(除韭菜)、果菜類、豆菜類、瓜菜類、根菜類(除胡蘿 卜、菱白等)中甲胺磷、氧化 樂果、對硫磷、甲拌磷、久效磷、倍硫磷、殺撲磷、敵敵畏、克百威、涕滅威、滅多威、抗蚜威、丁硫克百威、甲 蔡威、丙硫克百威、速滅威、殘殺威、異丙威等的農(nóng)藥殘毒快速檢測

2 原理

    有機磷和氨基甲酸醋類農(nóng)藥能抑制昆蟲中樞和周圍神經(jīng)系統(tǒng)中乙酞膽堿酶的活性，造成神經(jīng)傳導介質(zhì)乙酞膽堿的積累，影響正常傳導，使昆蟲中毒致死，根據(jù)這一昆蟲毒理學原理，用在對農(nóng)藥殘留的檢測中。加人反應試劑后，用分光光度計測定吸光值隨時間的變化值，計算出抑制率，判斷蔬菜中含有機磷

或氨基甲酸酷類農(nóng)藥的殘毒情況。即:
乙酞膽堿醋酶+有機磷或氨基甲酸醋類農(nóng)藥一 酶活性被抑制活性被抑制一 樣本中含有機磷或氨基甲酸醋類農(nóng)藥乙酞膽堿醋酶+樣本提取液 活性正常一 樣本中不含有機磷或氨墓甲酸酷類農(nóng)藥如以乙酞硫代膽堿(AsCh)為底物，在乙酞膽堿酷酶(AChE)的作用下乙酞硫代膽堿(AsCh)水解成硫代膽堿和乙酸，硫代膽堿和二硫雙對硝基苯甲酸(DTNB)產(chǎn)生顯色反應，使反應液呈黃色，在分光光度410nm處有**吸收峰，用分光光度計可測得酶活性被抑制程度(用抑制率表示)。
3 試劑 pH8磷酸緩沖液。
4丁酞膽堿醋酶:根據(jù)酶活性情況按要求用緩沖液溶解，AA值控制在0.4-0.8之間
5 底物:碘化硫代丁酞膽堿(s-butyrylthiocholineiodide，即BTCD，用緩沖液溶解。

6顯色劑:二硫代二硝基苯甲酸5〔,5-dithiobis(nitrobenzoicacid，即DTNB)，用緩沖液溶解

7 儀器了波長為4工。nm士3nn)專用速測儀，或可見光分光光度計。
中華人民共和國農(nóng)業(yè)部2001一06-01批準                                          2001門0一01實施

8微型樣品混合器
9臺式培養(yǎng)箱
10可調(diào)移液槍:(10^1001,L,1-5ml)
概不銹鋼取樣器(內(nèi)徑2cm),
11 配套玻璃儀器及其他配件等。
12 檢測門取樣用不銹鋼管取樣器取來自不同植株葉片(至少8^10片葉子)的樣本;果菜從表皮至果肉1- 1.5cm處取樣。
檢測過程
取2g切碎的樣本(非葉菜類取4g),放人提取瓶內(nèi)，加人20mL緩沖液，震蕩1^-2min，倒出提取
液，靜止3^-5min;于小試管內(nèi)分別加人50IL酶,3mL樣本提取液，50pL顯色劑，于37-38C下放置
30min后再分別加人50ML底物，倒人比色杯中，用儀器進行測定。

檢測結(jié)果計算
檢測結(jié)果按式((1)計算:

式中:AA— 對照組3min后與3min前吸光值之差;

     AA,— 樣本3min后與3min前吸光值之差。
抑制率)70%時，蔬菜中含有某種有機磷或氨基甲酸酷類農(nóng)藥殘毒。此時樣本要有2次以上重復檢

測，幾次重復檢測的重現(xiàn)性應在80%以上

6最低檢出濃度